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小鼠PEDF基因的克隆鉴定及原核表达分析

简介:基因的克隆鉴定及原核表达分析杨 森1 吴艳芳2 贾岩龙1①(1.新乡医学院药学院 新乡 453003 2.新乡医学院基础医学院 新乡 453003)摘要:目的:克隆小鼠PEDF基因,构建其原核表达载体并进行初步诱导表达.方法:根据GenBank提供的mRNA序列设计引物,并分别加上EcoRI/HindIII酶切位点.提取小鼠肝脏总RNA,RT-PCR法扩增小鼠PEDF基因,然后连接到T载体并测序鉴定.将酶切得到的PEDF基因连接到原核表达载体pET-28a,酶切验证.将构建好的重组载体转化到表达菌株E.coliM15中,经过IPTG诱导后对细胞破碎液进行SDS-PAGE电泳检测.结果:测序表明成功克隆小鼠PEDF基因,酶切表明小鼠PEDF基因原核表达载体构建成功,SDS-PAGE电泳表明重组载体能够在E.coliM15中进行诱导表达.结论:成功克隆小鼠PEDF基因,并构建其原核表达载体,重组载体能够在E.coliM15中内进行诱导表达. 关键词:关键词:血管生成抑制因子 小鼠 色素上皮衍生因子 原核表达
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