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巨细胞病毒重组抗原的制备纯化及鉴定
简介：王良梅 李智洋 许红攀 南京医科大学第二附属医院检验科 夏艳艳 庞露 司进* 210011 【摘要】 目的 应用生物信息学技术对人类巨细胞病毒（Human Cytomegalovirus,HCMV）分子进行抗原表位预测，筛选出了具有可能诊断价值的线性表位分子，构建并表达具有多表位的重组融合蛋白并进行免疫原性鉴定。方法 GenBank中查询HCMV氨基酸序列，利用BepiPred 、ABCpred、BcePred、PREDICTED四种在线表位预测软件进行细胞表位预测，筛选出可能的抗原决定簇表位，构建、原核表达，并利用免疫印迹实验筛选出可用的表位抗原，原核表达出融合蛋白，用Western Blot 和ELISA检测其抗原性。 结果 综合预测分析结果，得出13种可能的表位，构建出pET32a原核表达载体，表达并纯化这13种表位的融合蛋白，经免疫印迹技术筛选出gp52、GB3、PP150-1、GB-5具有较强的抗原性表位，通过Ni2+亲和柱纯化，对gp52融合蛋白免疫印迹试验结果表明，蛋白抗原性较强；ELISA法鉴定具有较高的抗原性及特异性。结论 在原核表达系统中能获得高效表达，纯化的融合蛋白具有较 关键词：预测软件 抗原表位 原核表达 纯化 鉴定
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