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结核分枝杆菌 Ｒｖ２０４１ｃ基因的克隆及表达

简介：吴利 黄灵 葛章文 廖萍 （１．遵义市播州区人民医院 检验科 贵州 遵义 ５６３１００；２．贵州省人民医院 贵州 贵阳 ５５００００） 〔摘要〕目的：为了寻找新型的免疫原性抗原来改善结核分枝杆菌感染的诊断技术，合成并表达结核分枝杆菌结核分枝杆菌融合抗原 Ｒｖ２０４１ｃ，有助于探讨其在结核病血清学中的诊断价值。方法：本课题应用 ＰＡＳ（ＰＣＲ－ｂａｓｅｄＡｃｃｕｒａｔｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ）的方法，获得的重组质粒 ｐＥＴ－２１ｂ－Ｒｖ１４１９转入Ｔｏｐ１０克隆菌株中进行表达。结果：使用 ＩＰＴＧ诱导表达目的蛋白 Ｒｖ２０４１ｃ。优化表达条件，将诱导条件调整至 ３７℃，经分析目标蛋白主要呈包涵体形式。通过变复性的方式，重溶目标蛋白 Ｒｖ２０４１ｃ，镍柱亲和纯化获得目的蛋白，发现该蛋白质主要位于包涵体中。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示该蛋白的分子量约为 ４７ｋＤａ，与理论值大小相符，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ进一步证实了表达蛋白。结论 关键词：结核分枝杆菌 Ｒｖ２０４１ｃ 基因合成 蛋白表达 《中国组织化学与细胞化学杂志》2020年12月 29卷 临床医学专集

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